Priprava vzorca:
Zbiranje vzorcev: Zberite vzorce, kot so kri, tkiva, slina in urin glede na namen poskusa.
Ekstrakcija DNK: Za ekstrakcijo DNK iz vzorca uporabite namenski komplet za ekstrakcijo DNK.
Priprava reakcije PCR:
Oblikovalni temeljni premazi: Oblikujte specifični pari temeljnih premazov, ki temeljijo na ciljnem zaporedju za amplifikacijo predloge DNK.
Pripravite reakcijsko mešanico: vključno s predlogo DNK, prajmeri, pufer, DNK polimerazo, DNTPS (deoksinukleozidni trifosfati), mg 2+ itd.
Nastavi PCR program:
Nastavitve instrumentov PCR: vnesite prednastavljene parametre cikla PCR, kot so 95 stopinjska temperatura predgrevanja, temperatura denaturacije (na primer 95 stopinj), temperatura žarjenja (na primer 55 stopinj), temperatura podaljšanja (na primer 72 stopinj) in število ciklov.
PCR reakcija:
Dodajte vzorec: dodajte reakcijsko mešanico v reakcijsko rezervoar PCR ali čip in vsak vzorec ima ponavadi eno reakcijsko vrtino.
Izvedite PCR: cikli instrumentov PCR v skladu s prednastavljenim programom, vključno s koraki ogrevanja, hlajenja, žarjenjem in podaljšanjem.
Analiza izdelka:
Hlajenje po amplifikaciji: Po zaključku PCR se vzorec na kratko ohladi pri 4 stopinji.
Elektroforetska ločevanje: za ločevanje PCR produktov različnih dolžin uporabite tehnologijo gela elektroforeze, kot je agarozna gel elektroforeza.
Fluorescenčno skeniranje: fluorescentno označene primere oddajajo svetlobo specifične valovne dolžine v ojačanem izdelku, instrument PCR pa te signale bere in jih beleži.
Obdelava podatkov in interpretacija podatkov:
Programska oprema za analizo podatkov: Za analizo fluorescentnega signala in izračunavanje koncentracije ali relativne koncentracije ciljnega fragmenta uporabite specializirano programsko opremo.
Razlaga rezultatov: Na podlagi krivulje PCR in izhodiščne črte določite, ali je PCR uspešen, ali ciljni fragment obstaja in koliko je.
Rezultat zapisovanja in ohranjanje:
Rezultate zapišite v eksperimentalno poročilo in pravilno ohranite izvirne podatke in vzorce.